[1]原红军,吴爱国,王梦川,等.正常和低氧环境下转染beclin-1 对乳腺癌细胞BT-549 的抑制作用[J].中华乳腺病杂志(电子版),2012,6(4):383-393.
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正常和低氧环境下转染beclin-1 对乳腺癌细胞BT-549 的抑制作用()

中华乳腺病杂志（电子版）[ISSN:1674-0807/CN:11-9146/R]

卷:
第6卷
期数:
2012年4期
页码:
383-393
栏目:
论著
出版日期:
2012-08-01

文章信息/Info

作者:
原红军;吴爱国;王梦川;王日玮;李学孝;胡斌;邵国利;纪术峰;吴凯;范旭龙;郑临海
南方医科大学珠江医院普外科
关键词:
beclin-1 基因; 乳腺肿瘤; 自噬
摘要:
目的 研究转染beclin-1 基因对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞BT-549 在正常及低氧环境下的增殖抑制情况,促自噬和促凋亡作用,以及其对细胞迁移能力的影响。方法 利用脂质体将真核载体pDS-RED-C1-beclin-1 转染进入BT-549 细胞作为实验组,空白组细胞和转染pDS-RED-C1 空质粒的细胞分别作为空白对照组和阴性对照组,用RT-PCR 检测转染后beclin-1mRNA 表达,Western blot 检测转染后蛋白表达。在正常及低氧环境下分别培养后用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测细胞增殖率,吖啶橙染色后用荧光显微镜观察细胞自噬情况,流式细胞仪检测细胞凋亡百分比。通过细胞划痕试验研究转染beclin-1 基因对细胞迁移能力的影响。RT-PCR 和Western blot 结果及MTT 所测增殖率结果用单因素方差分析,自噬和凋亡的差异采用卡方检验分析。结果 beclin-1 基因被成功转染进细胞;转染后目的基因组beclin-1 mRNA 和蛋白表达均高于对照组,72 h 最明显。MTT 测定结果:正常与低氧环境下实验组48 h 和72 h 增殖率均低于对照组(48 h P1 =0.002,P2 =0.000;72 h P1 =0.006,P2 =0.001; P1 和P2 分别为正常与低氧环境下统计结果),beclin-1 与低氧刺激有明显交互作用(P =0.016),即二者能增强彼此对细胞增殖率的抑制作用。吖啶橙染色镜下观察正常和低氧环境下实验组自噬发生率明显高于空白对照组(P1 =0.004,P2 =0.001),阴性对照组与空白对照组间差异无统计学意义(P>0.050)。流式细胞仪检测正常和低氧环境下实验组凋亡发生率均高于空白对照组(P1 =0.045,P2 =0.008)。体外划痕试验发现转染beclin-1 后细胞迁移能力降低。结论 在正常和低氧环境下,转染beclin-1 基因可抑制TNBC 细胞BT-549 增殖,促进细胞发生自噬及凋亡,并且降低其迁移能力。

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更新日期/Last Update: 2012-01-20