[1]齐晓伟,杨新华,张毅,等.ilms瘤基因1低表达和过表达乳腺癌细胞模型的建立[J].中华乳腺病杂志(电子版),2013,7(4):238-244.
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ilms瘤基因1低表达和过表达乳腺癌细胞模型的建立()

中华乳腺病杂志（电子版）[ISSN:1674-0807/CN:11-9146/R]

卷:
第7卷
期数:
2013年4期
页码:
238-244
栏目:
论著
出版日期:
2013-08-01

文章信息/Info

作者:
齐晓伟;杨新华;张毅;范林军;张帆;陈莉;唐振宁;张彦;杨晓宁;宗贝歌;胡保全;王明浩;姜军
第三军医大学西南医院乳腺外科
关键词:
Wilms瘤基因1; RNA干扰; RNA激活; 乳腺肿瘤
摘要:
目的 应用RNA干扰(RNAi)和RNA激活(RNAa)技术,分别构建小干扰RNA(siRNA)和双链RNA(dsRNA),建立Wilms瘤基因1(WT1)低表达和过表达的乳腺癌细胞模型。方法 以国外学者提供的3条序列(siRNA-516、siRNA-803、siRNA-1029)构建WT1 siRNA干扰表达WT1,以研究已证实可上调WT1表达的序列(dsRNA-319)构建dsRNA过表达WT1,通过脂质体(LipofectamineTM 2000)分别将siRNA和dsRNA转入MDA-MB-321和MCF-7细胞。WT1有效siRNA筛选实验分为6组:WT1 siRNA-516、WT1 siRNA-803、WT1 siRNA-1029、阴性对照、脂质体组和空白细胞组;观察转染效率的时间点为转染后24、48、72 h。WT1 dsRNA的筛选实验分为3组:WT1 dsRNA-319、阴性对照组和空白细胞组;观察转染效率的时间点为转染后48、72、96 h。通过实时定量PCR(qRT-PCR)和Western Blotting筛选作用效果最明显的siRNA和dsRNA。使用单因素方差分析进行统计学分析。结果 成功构建WT1 siRNA-516、WT1 siRNA-803和WT1 siRNA-1029共3个siRNA,并转染到MDA-MB-231细胞中,转染效率达90%以上。上述3个WT1 siRNA均能够抑制WT1 mRNA和蛋白的表达,以转染后48 h WT1 siRNA-1029的效果最为显著[WT1 siRNA-1029组WT1 mRNA表达水平与空白细胞组相比显著降低(0.49±0.02比1.00±0.08,P=0.00),其蛋白表达水平也明显降低]。成功将WT1 dsRNA-319转染到MCF-7细胞中,转染效率达90%以上。50 μmol/L 的WT1 dsRNA-319转染后96 h,MCF-7细胞的WT1过表达最为显著[WT1 dsRNA-319组的WT1 mRNA表达水平与空白细胞组相比显著升高(319.06±14.84比1.00±0.07,P=0.00),其蛋白表达水平也明显升高]。结论 成功建立低表达WT1的MDA-MB-231细胞和过表达WT1的MCF-7细胞模型,为后续进一步研究WT1在乳腺癌中的生物学行为奠定了基础。

相似文献/References:

[1]刘安定,董学君,杨明峰,等.siRNA 沉默hTERT基因表达对人乳腺癌细胞[J].中华乳腺病杂志(电子版),2008,2(5):538.
[2]陈亚宁,朱晨芳,顾岩.胰岛素样生长因子1型受体短发夹RNA抑制乳腺癌增殖和迁移能力的体外实验研究[J].中华乳腺病杂志(电子版),2011,5(1):49.
[3]张帆,唐振宁,杨新华,等.RNA干扰对MDA-MB-231乳腺癌细胞株骨保护素基因表达的抑制作用[J].中华乳腺病杂志(电子版),2011,5(2):189.

更新日期/Last Update: 2013-01-20