[1]郑临海,吴爱国,范旭龙,等.短程低氧条件下乳腺癌BT549 细胞表达beclin 1 基因对上皮间质转化的影响[J].中华乳腺病杂志(电子版),2014,8(1):13-21.
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短程低氧条件下乳腺癌BT549 细胞表达beclin 1 基因对上皮间质转化的影响()

中华乳腺病杂志（电子版）[ISSN:1674-0807/CN:11-9146/R]

卷:
第8卷
期数:
2014年1期
页码:
13-21
栏目:
论著
出版日期:
2014-02-01

文章信息/Info

作者:
郑临海;吴爱国;范旭龙;王梦川;邵国利;纪术峰;焦庆丽
南方医科大学珠江医院普外科
关键词:
乳腺肿瘤; 细胞低氧; 上皮间质转化; beclin 1
摘要:
目的 beclin 1 基因慢病毒表达载体稳定感染三阴性乳腺癌BT549 细胞后,于短程低氧条件下探讨beclin 1 基因对上皮间质转化(EMT)的影响。方法 用带有pLenO-GTP Vector 及pLenO-GTP-beclin 1 Vector 的慢病毒以感染复数(MOI)为20 分别感染BT549 细胞,即实验对照组及实验组,未感染细胞作为空白对照。感染96 h 后用倒置荧光显微镜观察荧光,估计感染效率;用Western blot 法检测beclin 1 基因是否在BT549 细胞中稳定表达;将各组细胞低氧培养12、24 h 后采用荧光定量PCR、Western blot 法及激光共聚焦显微镜检测EMT 相关标志物;用Western blot 法检测低氧培养24 h 后的各组细胞Wnt/ β-catenin 信号通路的相关蛋白表达水平。用两样本t 检验分析低氧时间对细胞EMT 相关标志物的表达情况,余计量资料用方差分析进行统计。结果 慢病毒感染BT549 细胞96 h 后,感染效率约为100%,实验组beclin 1 蛋白高效稳定表达(F =107.200,P =0.000);低氧条件下,相对于空白对照组、实验对照组,实验组细胞的上皮标志物E-cadherin mRNA 和蛋白表达水平上调(12 h:F = 122.451、P =0.000,F =29.651、P =0.001;24 h:F = 108.783、P = 0.000,F = 41.232、P = 0.000),而间皮标志物N-cadherin、vimentin 及fibronectin 表达水平下调(12 h:N-cadherin F = 92.918、P = 0.000、F = 138.034、P =0.000,vimentin F =135.313、P = 0.000、F = 39.765、P = 0.000,fibronectin F = 144.275、P = 0.000;24 h:N-cadherin F = 76.064、P = 0.000、F = 40.614、P = 0.000,vimentin F = 206.576、P = 0.000、F = 46.658、P =0.000,fibronectin F =411.405、P =0.000);相对于低氧培养12 h,各组细胞低氧培养24 h 后E-cadherin 表达水平下调(空白对照组:t =4.266、P =0.013,t =11.235、P =0.000;实验对照组:t =10.463、P =0.000,t =4.092、P = 0.009;实验组:t = 28.208、P = 0.000,t = 7.262、P = 0.001),而N-cadherin(实验组除外)、vimentin 和fibronectin 表达水平上调(空白对照组:N-cadherin t = 3.072、P = 0.037、t = 7.146、P = 0.002,vimentin t =6.384、P =0.003、t =7.476、P =0.002,fibronectin t =8.389、P =0.001;实验对照组:N-cadherint =2.805、P =0.049、t =5.352、P =0.006,vimentin t =12.701、P =0.000、t =5.923、P =0.004,fibronectin t =7.318、P = 0.002;实验组:N-cadherin t = 7.849、P = 0.001、t = 1.987、P = 0.184,vimentin t = 11.097、P =0.000、t = 13.626、P = 0.000,fibronectin t = 11.003、P = 0.000);beclin 1 基因与低氧环境对BT549 细胞E-cadherin、N-cadherin 的表达水平有交互效应(E-cadherin: F = 19.175、P = 0.000,F = 5.588、P = 0.015;N-cadherin: F =8.238、P =0.006,F =5.934、P =0.016);低氧培养24 h 后,实验组Wnt/ β-catenin 信号通路的β-catenin、Snail 蛋白水平下调(β-catenin: F =18.169, P =0.003;Snail: F =11.098, P =0.010),而p-GSK-3β的蛋白水平上调(F =36.096, P =0.000)。结论 beclin 1 基因在短程低氧条件下抑制BT549细胞EMT,而随时间的增加低氧促进EMT;beclin 1 基因在短程低氧环境下抑制EMT 的机制可能与Wnt/ β-catenin 信号通路有关。

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更新日期/Last Update: 2014-01-20