[1]邝中淑曾兴王萍罗黄超马江淑陈梅李艳周定安郑晓东.SASH1 基因通过p53 信号通路调节乳腺癌细胞增殖[J].中华乳腺病杂志：电子版,2016,10(5):269-275.
　[J].Chinese Journal of Breast Disease (Electronic Version),2016,10(5):269-275.
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SASH1 基因通过p53 信号通路调节乳腺癌细胞增殖()

中华乳腺病杂志：电子版[ISSN:1674-0807/CN:11-9146/R]

卷:
第10卷
期数:
2016年5期
页码:
269-275
栏目:
论著
出版日期:
2016-09-28

文章信息/Info

作者:
邝中淑1曾兴1王萍2罗黄超1马江淑1陈梅1李艳1周定安3郑晓东4
重庆医科大学第五临床学院临床医学系1 ;成都军区总医院急诊科2 ;重庆医科大学附属永川医院检验科3 ;重庆市肿瘤医院/肿瘤研究所乳腺科4
关键词:
乳腺肿瘤; p53 基因; SASH1 蛋白质;  人
文献标志码:
A
摘要:
目的 探讨SASH1 基因对乳腺癌细胞增殖的作用及其与p53 基因的关系。方法 购买134 例乳腺癌组织芯片(上海芯超科技有限公司,芯片型号:HBre-Duc150Sur-01 ),用SASH1 和p53 抗体进行组织芯片免疫组织化学染色分析。构建重组质粒SASH1-PEGFP-C3 (GFP-SASH1)、HA-p53-pcDNA3.0(HA-Tp53),定点突变SASH1 基因上581、594、605、610 位点(D581V-SASH1、W594L-SASH1、F605S-SASH1、V610E-SASH1)和p53 基因上175、248、273 位点(R175H-p53、R248W-p53、R273H-p53)。实验分组如下:(1)将0、0.5、1.0、2.0、4.0 滋g 的HA-Tp53 单独转染或分别与2.0 滋g 的GFP-SASH1 共同转染至HEK-293T 细胞,用Western blot 检测p53 对GFP-SASH1 和endo-SASH1 表达的影响。(2)将0、0.5、1.0、2.0、4.0 滋g 的GFP-SASH1 单独转染或分别与2.0 滋g 的HA-Tp53 共同转染至HEK-293T 细胞,用定量RT-PCR 检测p53 mRNA 及蛋白表达。(3)2.0 滋g 的HA-pcDNA3.0(空载体),野生型p53(wt-p53),突变型R175H-p53、R248W-p53、R273H-p53 单独转染或分别与2.0 滋g 的GFP-SASH1 共同转染至HEK-293T 细胞,用Western blot 检测GFP-SASH1 和endo-SASH1 表达。(4)将2.0 滋g 的空载体,野生型-SASH1,突变型D581V-SASH1、W594L-SASH1、F605S-SASH1、V610E-SASH1 单独转染或与2.0 滋g的HA-Tp53 共同转染HEK-293T 细胞, 另设未经处理细胞为空白对照,Western blot 检测HA-Tp53 和endo-Tp53 表达。用Spearman 相关系数法对SASH1 与p53 免疫组织化学结果进行分析,用单因素方差分析方法比较SASH1 与p53 的表达量,两两比较采用LSD-t 法。结果 在134 例人乳腺癌组织芯片中,SASH1 和p53 的表达呈正相关(r = 0.319, P<0.001)。其中,SASH1(-)4 例、(+) 42 例、(++)67 例、(+++)20 例、(++++)1 例, p53 (-)82 例、(+)36 例、(++)10 例、(+++)6 例。随着HA-Tp53 转染剂量的增大,外源性SASH1(GFP-SASH1)和内源性SASH1(endo-SASH1)的表达水平都增高(F = 205.369、178.238,P 均<0.001)。随着GFP-SASH1 转染剂量的逐渐增大,HA-Tp53 mRNA 及蛋白表达量逐渐增加(F =67.481、506.538,P 均<0.001)。突变型SASH1 使内源性和外源性p53 表达上调(F = 165.767、1136.930, P 均<0.001);突变型p53 抑制内源性和外源性SASH1 表达(F = 57.142、354.517, P 均<0.001)。结论 SASH1 与p53 正相关, 对乳腺癌细胞增殖起调节作用。

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更新日期/Last Update: 2016-12-12