[1]张帆,唐振宁,杨新华,等.RNA干扰对MDA-MB-231乳腺癌细胞株骨保护素基因表达的抑制作用[J].中华乳腺病杂志(电子版),2011,5(2):189-197.
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RNA干扰对MDA-MB-231乳腺癌细胞株骨保护素基因表达的抑制作用()

中华乳腺病杂志（电子版）[ISSN:1674-0807/CN:11-9146/R]

卷:
第5卷
期数:
2011年2期
页码:
189-197
栏目:
实验研究
出版日期:
2011-04-01

文章信息/Info

作者:
张帆;唐振宁;杨新华;徐琰;范林军;张毅;陈莉;周艳;陈庆秋;姜军
第三军医大学西南医院乳腺疾病中心
关键词:
乳腺肿瘤; 骨保护素; RNA干扰; MDA-MB-231细胞
摘要:
目的 构建针对骨保护素（OPG）基因的一个载体编码三条短发夹RNA（shRNA）的真核表达质粒，观察其对MDA-MB-231乳腺癌细胞株OPG表达的抑制作用。方法 选择3个针对OPG基因的RNA干扰（RNAi）位点，分别设计合成3对编码相应shRNA的DNA单链，每对单链连接形成双链后分别与线性化载体pGenesil-1.1、pGenesil-1.2、pGenesil-1.3连接形成pGenesil-1.1-shRNA1、pGenesil-1.2-shRNA2、pGenesil-1.3-shRNA3，对以上重组载体反复酶切连接，构建成重组质pGenesil-1.1-1.2-1.3-shRNA1-shRNA2-shRNA3，酶切鉴定和测序无误后，将该质粒转染MDA-MB-231细胞，以G418 加压筛选，对转染细胞行单克隆化，稳定转染细胞行RT-PCR和Western blot检测，确定其对OPG 基因表达抑制作用。统计分析采用单因素方差分析和SLD分析法。结果 成功构建了pGenesil-1.1-1.2-1.3-shRNA1-shRNA2-shRNA3重组质粒；以该质粒稳定转染MDA-MB-231细胞后其OPG mRNA和蛋白表达均较对照差异有统计学意义(P<0.05)，RNAi对OPG mRNA和蛋白的表达抑制率分别为91%和73%。结论 本研究构建了针对OPG的一个载体编码3条shRNA的真核表达质粒，通过RNAi抑制了MDA-MB-231细胞OPG基因表达，为进一步深入探讨肿瘤细胞自身OPG表达在乳腺癌骨转移发生发展中的作用提供了相关实验基础。

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更新日期/Last Update: 2011-01-20