[1]骆广涛,施航,王本忠. EZH2 基因在他莫昔芬耐药乳腺癌MCF-7细胞系的表达及其对细胞增殖的影响[J].中华乳腺病杂志：电子版,2015,9(1):23-29.
　[J].Chinese Journal of Breast Disease (Electronic Version),2015,9(1):23-29.
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 EZH2 基因在他莫昔芬耐药乳腺癌MCF-7细胞系的表达及其对细胞增殖的影响()

中华乳腺病杂志：电子版[ISSN:1674-0807/CN:11-9146/R]

卷:
第9卷
期数:
2015年1期
页码:
23-29
栏目:
论著
出版日期:
2015-02-01

文章信息/Info

作者:
 骆广涛; 施航; 王本忠
关键词:
乳腺肿瘤; 他莫昔芬; RNA;  小分子干扰; MCF-7 细胞; EZH2
文献标志码:
A
摘要:
目的 检测EZH2 基因在他莫昔芬耐药乳腺癌MCF-7 细胞(MCF-7/ Tam+细胞)及他莫昔芬敏感乳腺癌MCF-7 细胞(MCF-7/ Tam-细胞)的表达,并探讨EZH2 对两种乳腺癌细胞系增殖的影响。方法 首先通过Western blot 法在MCF-7/ Tam+细胞和MCF-7/ Tam-细胞中检测EZH2 蛋白表达差异,并采用10 nmol/ L 的雌二醇和10 nmol/ L 4-羟他莫昔芬(4-OHT)分别处理MCF-7/ Tam-细胞24 h 后检测EZH2 蛋白的变化。使用LipofectamineTM 2000 将靶向抑制EZH2 的siRNA(siRNA-EZH2)转染至MCF-7/Tam+细胞,运用实时PCR 检测EZH2 mRNA 的相对表达量,Western blot 法检测EZH2 蛋白表达量,以验证siRNA 的有效性。最后将siRNA-EZH2 转染至MCF-7/ Tam-和MCF-7/ Tam+细胞,采用细胞计数检测细胞数,用MTT 法检测细胞增殖情况(570 nm 波长处吸光度值)。计量资料用-x±s 表示,两组均数比较用t 检验,细胞计数比较采用重复测量的方差分析。结果 EZH2 蛋白在MCF-7/ Tam+细胞中相对表达量为2.237±0. 091,高于在MCF-7/ Tam-细胞中的相对表达量(1. 870±0. 114)(t =8. 582,P =0. 013)。经10 nmol/ L 的雌二醇诱导MCF-7/ Tam-细胞24 h 后EZH2 蛋白相对表达量为0. 657±0. 015,阴性对照组EZH2 相对表达量为0. 480±0.017,而相同浓度的4-羟基他莫昔芬处理MCF-7/ Tam-细胞24 h 后EZH2蛋白相对表达量为0. 423±0. 012,雌二醇+他莫昔芬处理组为0. 483±0. 006,4 组差异有统计学意义(F =175. 032,P =0. 000)。将siRNA-EZH2 转染至MCF-7/ Tam+细胞后,转染siRNA-EZH2 组与空质粒转染组(siRNA-Control 组)EZH2 mRNA 相对表达量分别为0. 310±0. 062、1.007±0. 136,差异有统计学意义(t =14. 061,P =0. 005);转染siRNA-EZH2 组与siRNA-Control 组EZH2 蛋白的相对表达量分别为3.783±0.045、6. 500±0. 327,差异有统计学意义(t =15. 366,P =0. 004)。细胞计数结果显示,转染siRNA-EZH2的MCF-7/ Tam-细胞组(Tam-EZH2 组)的细胞数(单位:1伊105 )在第3、4、5 天分别为7. 540±0.790、10.243±1. 360、14. 270±1. 992,Tam-Control 组细胞数在第3、4、5 天分别为12. 113±1. 666、17. 853±1.900、25.670±2.318,组间差异有统计学意义(F =77. 515, P =0. 001);转染siRNA-EZH2 的MCF-7/ Tam+细胞组(Tam+EZH2 组)细胞数在第3、4、5 天分别为6. 373±0. 863、7. 680±1. 077、8. 813±1. 165,Tam+Control 组细胞数在第3、4、5 天分别为12. 553±2. 878、19. 780±2. 400、31. 617±3. 081,组间差异有统计学意义(F =702. 347, P =0. 000)。MTT 结果显示Tam-EZH2 组及Tam-Control 组细胞在570 nm 波长处的吸光度值分别为0. 643±0. 085 及1. 120±0. 135,差异有统计学意义(t =9. 676, P =0. 011);Tam+EZH2 组及Tam+Control 组在570 nm 波长处的吸光度值分别为0. 313±0. 075 及1. 350±0. 101,差异有统计学意义(t =65. 069, P =0. 000)。结论 EZH2 在MCF-7/ Tam+细胞中高表达,并能促进细胞增殖。

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更新日期/Last Update: 2015-08-18