[1]侯令密,谢少利,陈茂山,等.E6-AP基因在乳腺癌MDA-MB-231细胞中调节膜联蛋白A2的表达[J].中华乳腺病杂志：电子版,2016,10(6):326-332.
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E6-AP基因在乳腺癌MDA-MB-231细胞中调节膜联蛋白A2的表达()

中华乳腺病杂志：电子版[ISSN:1674-0807/CN:11-9146/R]

卷:
第10卷
期数:
2016年6期
页码:
326-332
栏目:
论著
出版日期:
2016-12-01

文章信息/Info

作者:
侯令密1; 2; 谢少利1; 陈茂山3; 李敬东2; Emmanuel Ajedichiga Aduah2; 王明浩4; 邓世山5; 幸天勇1; 赵小波 1
川北医学院附属医院甲状腺乳腺外科1、肝胆胰肠研究所2、解剖学教研室5;遂宁市中心医院乳腺甲状腺外科3;第三军医大学附属西南医院乳腺外科 4
关键词:
乳腺肿瘤; 细胞增殖; 细胞凋亡; 肿瘤侵润
文献标志码:
A
摘要:
目的 检测E6-AP基因及膜联蛋白A2(AnnexinA2)在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达,探讨其对癌细胞增殖、凋亡及浸润转移的影响。方法 设计1条无关序列Negative-siRNA作为阴性对照组和针对E6-AP基因的3条特异性E6-AP-siRNAs片段转染至MDA-MB-231细胞内作为实验组,未经处理细胞作为空白对照组,加入脂质体处理的细胞为脂质体组,利用RT-PCR检测干扰E6-AP后在MDA-MB-231细胞中E6-AP和AnnexinA2mRNA相对表达水平。选择出转染效率最高的E6-AP-siRNA1组及阴性对照组、空白对照组继续行后续实验。Westernblot检测干扰E6-AP后E6-AP和AnnexinA2在MDA-MB-231细胞中的蛋白的相对表达水平。利用CCK-8试剂盒法、流式细胞术、Transwell小室侵袭实验分别检测干扰E6-AP后MDA-MB-231细胞的增殖、凋亡、侵袭能力。基因的mRNA及蛋白表达水平、细胞凋亡率及细胞数的组间比较采用方差分析,两两比较采用LSD法,吸光度比较采用重复测量的方差分析。结果 转染72h后,E6-AP基因干扰后各实验组(E6-AP-siRNA1组、E6-AP-siRNA2组、E6-AP-siRNA3组)及空白对照组、阴性对照组及脂质体组中的E6-APmRNA相对表达水平分别为0.159±0.003、0.325±0.006、0.229±0.007、0.593±0.031、0.594±0.012、0.612±0.016,AnnexinA2mRNA相对表达水平分别为0.929±0.017、1.013±0.082、0.992±0.024、1.341±0.037、1.323±0.010、1.326±0.012,差异均有统计学意义(F=850.792、417.447,P均<0.050)。转染72h后,E6-AP-siRNA1组、空白对照组和阴性对照组中E6-AP及AnnexinA2蛋白相对表达水平为分别为0.271±0.017、0.492±0.018、0.477±0.016及0.447±0.034、0.887±0.022、0.849±0.033,组间差异均有统计学意义(F=256.850、350.149,P均<0.050)。转染24、48、72、96h后,E6-AP-siRNA1组、阴性对照组和空白对照组间比较,不同时间点之间比较,细胞吸光度差异均有统计学意义(F=524.828,P<0.001;F=904.079,P<0.001);分组与时间点存在交互作用(F=28.116,P<0.001)。转染72h后,空白对照组、阴性对照组、E6-AP-siRNA1组的凋亡率分别为2.959±0.117、3.097±0.070、10.812±0.199,组间差异有统计学意义(F=3110.005,P<0.050)。Transwell检测E6-AP-siRNA1组、空白对照组、阴性对照组中细胞穿透Matrigel胶到达Transwell下室的细胞数分别为99±5、96±6、62±7,组间差异有统计学意义(F=55.404,P<0.001)。结论 干扰E6-AP基因可使AnnexinA2表达下调,同时可诱导MDA-MB-231细胞的凋亡,其增殖、侵袭能力也受到抑制。

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更新日期/Last Update: 2017-02-09